¹Schweitzer Katalin, ¹F?rész József, ¹ Lakatos Zsuzsanna, ²Kovács G.Csongor, ³Regöly-Mérei János,
¹MH EVI Kórélettani Kutató Oszt., ² MH Központi Katonai Kórház Ált. Seb., ³SOTE III. Sebészeti Klinika BUDAPEST

Ismeretes, hogy a trombociták a hemosztázis fenntartásában játszott szerepen túl, a gyulladásos reakció során, az aktivált trombocitákból felszabaduló különböző mediátorok (adenin nukleotidok, hisztamin, szerotonin, PGE2) révén képesek a gyulladás pathomechanizmusát modulálni. Jelen munkánkban arra a kérdésre kerestük a választ, hogy hogyan változik akut pancreatitises betegek esetében a trombocita funkció a betegség korai szakaszában. A trombocita funkció meghatározást ADP indukálta, teljes vérbeni trombocita aggregáció és ATP release mérésével vizsgáltuk. Az aggregációt ohmban, a releaset nM ATP-ben adtuk meg. 18 beteget vizsgáltunk a betegség korai szakában (els? 10 nap, három alkalom). Megállapítottuk, hogy a bekerülés napján mért aggregabilitás értékek átlaga (4.6 ohm) -normál trombocita szám mellett (250 G/l)- a kontroll (16 ohm) érték alatt volt. A második vizsgálati alkalomra az aggregáció mértéke fokozódott (10 ohm), a harmadik mérési napon 21 ohm volt a mért aggregabilitás. A nagyon súlyos betegek esetében azonban elmaradt a trombocita aggrágációs készség fokozódása a második alkalomkor 8.3 ohm, míg az utolsó méréskor csak 3.7ohm-ot mértünk. Az ATP release mértékében ilyen nagy eltérések nem tapasztalhatók. Eredményeink alapján arra a következtetésre jutottunk, hogy az akut pancreatitis korai szakaszában rossz prognosztikai jelnek számít, ha a kezdeti nagyon alacsony trombocita aggregáció értéke nem emelkedik a harmadik – tizedik napok között.
 
 

AZ ACUT PANCREATITIS PATHOMECHANIZMUSÁNAK KOMPLEX VIZSGÁLATA

Regöly-Mérei János, Orgován György¹, Kovács Gábor Csongor¹, Fűrész József²

Semmelweis Orvostudományi Egyetem III.sz.Sebészeti Klinika, Magyar Honvédség KHK Sebészeti Osztálya¹ és Magyar Honvédség EVI Kórélettani Intézete²

Acut pancreatitis pathomechanizmusa csak részben ismert. Nem tudjuk mi a magyarázata, hogy egyik betegen csak oedemas gyulladás, a másikon kiterjedt necrosis alakul ki, mely sokszervi elégtelenséghez vezet. A monocyta/lymphocyta rendszer, a cytokinek, az endogén mediátorok, a splanchnikus keringés változások, az enterális bakteriális kontamináció és az endotoxinok szerepével számos munkacsoport foglalkozik, de mindezen tényezők együttes, komplex vizsgálatára nem került sor. Munkacsoportunk OTKA program keretében (T-016630) különböző súlyosságú esetekben vizsgálta:

TNF-aSZINT VÁLTOZÁSÁNAK KÖVETÉSE ACUT PANCREATITISBEN SZENVEDŐ BETEGEKEN

¹ Veszely Gizella, ²Regöly-Mérei János, ³Kovács Gábor Cs., ⁴Pap Gábor ¹Fűrész József

1 Magyar Honvédség Egészségvédelmi Intézete Budapest
2 SOTE III.sz. Sebészeti Klinika Budapest
3 Magyar Honvédség Központi Kórháza Budapest
4 Országos Traumatológiai és Rehabilitációs Intézet Budapest

Korábbi vizsgálataink szerint a teljesvér 16 órás inkubációja alkalmas az LPS indukálta fehérvérsejtek TNF-atermelésének vizsgálatára.16 acut pancreatitises beteget vizsgáltunk a kórházba kerülés első, harmadik és tizedik napján. Meghatároztuk a TNF-aszintet teljesvérből 0,1,5,10 pg/ml végkoncentrációjú LPS stimulus hatására, valamint 13 beteg, perifériásvéréből szeparált mononucleáris sejteket (MNC) 24 órás tenyésztés alatt stimuláltuk 5mg LPS-sel. Mindkét mintából sejtfelülúszókból mértük a TNF-aértékeket szendvics ELISA módszer segítségével. Eredményeink szerint az acut pancreatitisben szenvedő betegek fehérvérsejtjeinek spontán TNF-atermelése a kontrollhoz képest jelentősen fokozódik már a betegség korai szakaszában. A spontán TNF-a termelő képesség a kórházi ápolás harmadik napján tovább emelkedik és a tizedik napon is szignifikánsan emelkedett,mind a teljesvér mind a szeparált sejtek esetében, a kontrollhoz viszonyítva. LPS indukció hatására, míg a kontroll mintáknál TNF-atermelődés LPS koncentrációtól függően fokozódotaelválasztás LPS hatására a kórházi ápolás első-harmadik napján nem emelkedett szignifikánsan. Bár a tizedik napon a spontán TNF-atermelés a kontrollhoz viszonyítva még mindig magas, ez az érték 1 és 5 pg/ml LPS-sel tovább fokozható, addig 10 pg/ml LPS hatására a TNF-atermelődés lecsökken. Az 5 mg stimulus hatására a TNF-aszint a kontrollhoz képest 8-10x-re nő. Az indukció időbeli hatása tendenciájában a 10.napra csökkenést mutatott, nagy az egyéni különbségekkel . A vizsgált 16 betegek közül az átlag alatti spontán TNF-atermelést mutató hét betegből három beteg halt meg, míg az átlag feletti TNF-atermelést mutató betegek közül a vizsgálati időszakban senkit nem vesztettünk el (teljesvér minták ). A vizsgált 13 beteg közül három halt meg, akiknek mind a spontán, mind az indukált TNF-aszintje jóval az átlag alatt volt (MNC felülúszók).
 
 

A HEMOSZTÁZIS, AZ ANTIOXIDÁNS KAPACITÁS ÉS A SZÉRUM NITRIT/NITRÁT SZINT VÁLTOZÁSAI AKUT PANCREATITISBEN

Kerekes L.* , Árkosy P.* , Altorjay I.** , Kappelmayer J.*** , Huszka M.** , Vágvölgyi A.* , Sápy P* .

* DOTE II.sz. Sebészeti Klinika
** DOTE II.sz. Belgyógyászati Klinika
*** DOTE Klinikai Biokémiai és Molekuláris Pathológiai Intézet

A szerzők akut pancreatitises betegeknél a felvételt követő 1.,3.,7. napon vizsgálták az enzimek, lipidek, a totál antioxidáns státusz, a vizelet és a szérum nitrit/nitrát szintjének változását. Ezzel párhuzamosan mérték a thrombocyták aktivációját jelző CD62 marker expressióját, továbbá thrombocyta-leukocyta, vegyes aggregátumok százalékos arányát. A hemosztázis paraméterek közül szembetűnő a von Willebrandt faktor emelkedése, ami különösen nekrotizáló pancreatitisben volt szignifikánsan magasabb. Hasonló tendenciát mutatott a fibrinogén szint alakulása. Akut pancreatitisben a total antioxidans status nem szignifikáns csökkenése volt tapasztalható. A szérum és vizelet nitrit/nitrát szintje a kontrollhoz képest alacsonyabbnak adódott. A thrombocyta aktivációs marker az időbeli lefolyás során az első napon mérsékelten emelkedett, a későbbi időpontban szintje csökkent. A CD62 aktivációs érték az akut nekrotizáló csoportban volt a legmagasabb. Mindezen eltérések azt mutatták, hogy a hemosztázis az akut pancreatitis kezdeti szakaszában annak súlyossági fokától függően megváltozik és ez befolyásolja a mirigyben bekövetkező későbbi változásokat, a folyamat progresszióját.
 
 

HAEMOSTASIS ÉS ANTIOXIDANS STATUS VIZSGÁLATA CHRONICUS PANCREATITISBEN

Árkosy P.*, Kerekes L.* , Altorjay I.** , Kappelmayer J.*** , Huszka M.** , Tóth P.* , Sápy P.*

* DOTE II.sz.Sebészeti Klinika** DOTE II.sz. Belgyógyászati Klinika
*** DOTE Klinikai Biokémiai és Molekuláris Pathológiai Intézet

A DOTE II.sz. Sebészeti Klinikán chronicus pancreatitisben ill. a chronicus pancreatitis acut exacerbatioban szenvedő betegeknél vizsgálták, ill. hasonlították össze a szerzők az enzimek, lipidek, a total antioxidans status, vizelet és szérum nitrit/ nitrát szintjét a felvételt követő első-harmadik-hetedik napon. Egyidejűleg meghatározták új paraméterként a thrombocyták aktivációját jelző CD 62 marker expressioját, továbbá a thrombocyta-leukocyta vegyes aggregátumok százalékos arányát. Chronicus pancreatitisben a total antioxidans status csökkenése indirekt módon a szabadgyök terhelés fokozódását jelzi. A haemostasis paraméterek, a von Willebrand faktor szintjének emelkedése nem észlelhető. Az első napon mérsékelt thrombocyta aktiváció észlelhető, ami ezt követően egyenletesen csökken, a vegyes aggregátumok közül a kontrollt jóval meghaladó monocyta-thrombocyta vegyes aggregátumok képződése figyelhető meg. Az acut szakban látványos a thrombocyta szám emelkedés, az első napon a thrombocyta aktiváció a chronicusban mértnek kb. másfélszerese. A leukocyta subsetek thrombocyta marker expressioja nagyon jellegzetes lefutást mutat, végig emelkedik, a lymphocytán kisebb, a monocytán és granulocytán nagyobb mértékben.
Chronicus pancreatitisben a thrombocyta aktivációs markerek, ill. a haemostasis paraméterek változása signifinkánsan kisebb, mint az acut gyulladás esetén.
 
 

A TRIPSZIN ÉS LIPÁZ HATÁSÁNAK IN VITRO VIZSGÁLATA FOSZFOLIPÁZ A2 ENZIMEKKEL, ENDOTOXINNAL ÉS CYTOKINEKKEL ELŐKEZELT KUTYA PANCREAS METSZETEKEN

Kerekes L.*, Dezső B.***, Antal P.** , Furka I.**** , Mikó I.**** , Sipka S.** , Sápy P.*

* DOTE II. sz. Sebészeti Klinika
** DOTE III. sz. Belgyógyászati klinika
*** DOTE Pathológia Intézet,
**** DOTE Kísérletese Sebészeti Intézet

Egészséges kutyák fagyasztott és fixált hasnyálmirigy metszetein vizsgáltuk in vitro a tripszin és lipáz lítikus hatását foszfolipáz A2 (Pancreas eredetű, szekretált foszfolipáz A2, méh méreg eredetű) enzimekkel, E Coli endotoxinnal, továbbá TNF alfa és IL1 cytokinekkel való előkezeléssel ill. anélkül. A cytolítikus hatás értékelése a metszetek festése után fénymikroszkóppal történt . Azt találtuk, hogy a tripszin és lipáz lítikus hatásának érvényesüléséhez szükség van a hasnyálmirigy szövet “ előkészítésére” a foszfolipáz A2 enzimek, vagy az endotoxin, vagy a cytokinek által.
 
 

CSÖKKENT RES-FUNKCIÓ KÍSÉRLETES PANCREATITISBEN

Forgács B.*, Wudel E.**, Franke J.**, Eibl G., Foitzik T.

*II. sz. Sebészeti Klinika Semmelweis Orv. Tud. Egyet. Budapest, Sebészeti és **Radiológiai Klinika Freie Univ. Berlin

Bevezetés: A RES fontos védekező szerepet játszik gyulladásos eredetű megbetegedésekben. Működését azonban akut pancreatitisben (AP) még nem ismerjük kielégítően. Célkitűzés: A RES phagocyta aktivitásának meghatározása rádioaktiv molekulával jelölt kolloid segítségével AP-ben. Anyag és módszer: AP-t indukáltunk 24 patkányban intraductális epesav analóg és iv caerulein infusiójával. Kontroll (Kont.) állatoknál az infusiót fiziológiás sóoldattal végeztük. 6 és 24 óra elteltével az RES phagocyta funkcióját határoztuk meg ^99mTc jelölt Nanocoll és scintillatiós kamera segítségével. A máj felvételi ill. a vér leadási görbéjét vizsgáltuk, és logaritmikus regresszió segítségével a görbéket jellemző R paramétert határoztunk meg. A Nanocoll adását követő 10. és 30. percben vett vérminta segítségével a plasma Nanocoll clearancet megmértük. A kísérletek végén a máj colloid felvételét is meghatároztuk.
 

Eredmények:	6 h		24 h
	Kont.	AP	Kont.	AP
Clearance(ml/min)	3,1± 0,4	1,7± 0,2*	2,4± 0,6	2,1± 0,2
R-vérgörbe	2,5± 0,3	1,7± 0,3	2,5± 0,2	2,4± 0,3
R-májgörbe	13,7± 01	13,5± 0,2	13,3± 0,3	13,5± 02
Máj felvétel (%)	76± 4	74± 2	75± 5	76± 4
*p<0,05 vs. Kont. 6 h

Összefoglalás: 1)Az AP korai szakában (6h) az RES phagocyta aktivitásának csökkenését észleltük, mely 24 óra elteltével normalizálódik.2)A Nanocoll clearance megbízhatóbbnak tűnik, mint a scintigráfiás módszer. Következtetések: Az RES aktivitása csökkent az AP korai szakában. A 24 órán belüli normalizáció azonban megkérdőjelezi az RES phagocyta aktivitásában kialakult változás jelentőségét az AP lefolyásában.
 
 

A LIQUORBAN KIMUTATHATÓ CYTOKIN TERMELŐDÉS ALAKULÁSA TAUROKOLSAV ÁLTAL KIVÁLTOTT ACUT PANCREATITISBEN

Márton J., Farkas Gy., Szász Zs., Szkenderovics K., Mándi Y*., Avramov K**., Varga Cs***., Bretus I***

Sebészeti Klinika, Mikrobiológiai Intézet*, Neurológiai Klinika** Szent-Györgyi Albert Orvostudományi Egyetem, Összehasonlitó Élettani Tanszék*** József Attila Tudományegyetem, Szeged
Bevezetés A cytokin kaszkád aktiválódása meghatározó szerepet játszik az akut pancreatitis szövődményeinek, például a sokszervi elégtelenségnek a kialakulásában is. Előző kisérleteinkben már igazoltuk a vér-agy gát permeábilitásának, a TNF és az IL-6 termelődésének növekedését taurokolsav indukálta acut pancreatitisben.
Módszer Him Wistar patkányok cisterna magnájába rozsdamentes acélból készült kanült ültettünk be, mely ezt követően lehetővé tette éber állatokból is az ismételt liquor mintavételt. Az akut pancreatitist 200 ml 6%-os taurokolsav intraductális adásával hoztuk létre. A liquor cerebrospinális TNF és IL-6 koncentrációját WEHI-164 és B-9 sejtvonalon kifejtett hatásuk alapján mértük a pancreatitis indukciójával egyidőben illetve 6, 24, 48, 72 óra múlva.
Eredmények A pancreatitis indukcióját követően 6 óra múlva emelkedett TNF értéket (208± 75 U/l) tudtunk kimutatni. Az IL-6 szintje 6 és 24 óra múlva mérsékelt emelkedést mutatott (1528± 1560 pg/ml és 1322± 1524 pg/ml) mely 48 és 72 óra múlva csökkent (825± 625 pg/ml és 806± 656 pg/ml).
Következtetések Az akut nekrotizáló pancreatitis korai szakaszában a liquorban kimutatható emelkedett cytokin értékek szerepet játszhatnak a pancreatogén encephalopathia kialakulásában is.
 
 

CYTOKIN RENDSZER AKTIVÁLÓDÁSA ACUT NEKROTIZÁLÓ PANCREATITIST KÖVET?EN: KÉT KÜLÖNBÖZ? KISÉRLETES PATKÁNY MODELL ÖSSZEHASONLÍTÓ VIZSGÁLATA

Leindler L.¹, Márton J.¹, Mándi Y.², Szász Zs.¹, Szkenderovits K.¹, Jármai K.³, Farkas Gy¹. Sebészeti Klinika¹, Mikrobiológiai Intézet² és I. Belgyógyászati Klinika³. Szent-Györgyi Albert Orvostudományi Egyetem, Szeged.

Célkitűzés: Vizsgálatainkban a TNF és IL-6 szintek változásait hasonlítottuk össze két különböz? acut nekrotizáló pancreatitis modellben, patkányokon.
Módszerek: Az akut nekrotizáló pancreatitist hím Wistar patkányok egyik csoportján (I. CS) a f? pancreas vezeték kanülálásával és 200m l 6%-os taurokolsav injektálásával hoztuk létre, mig a második csoportban (II.CS) ezt a módszert még az a. liealis inferior 15 perces lefogásával is kiegészitettük. Az állatokat 6-12-24 órát követ?en vizsgáltuk. Amylase, TNF, IL-6 szinteket, nedves pancreas tömeg/testsuly arányát mértük és hisztológiai vizsgálatokat végeztünk.
Eredmények: A II. csoportban szignifikánsan magasabb mortalitást (63% vs. 43%, 24 óránál), ascites TNF szinteket (1075 ± 800 U/ml vs. 19 ± 14 U/ml), szérum és ascites IL-6 szinteket (3392 ± 1120 pg/ml vs.1000 ± 1000 pg/ml, 7750 ± 2000 pg/ml vs. 3000 ± 2000 pg/ml 12 és 24 óránál.)
Konkluziók: Kisérleteink azt sugalják, hogy ezen új pancreatitis modell egy igen érzékeny és jól használható eljárás lehet az ischaemia reperfúzió vizsgálatában.